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指纹图谱中 22 个共有峰,共指认出 15 个共有峰: 2 号峰味对羟基苯甲酸, 4 号峰味京尼平龙胆双糖苷, 5 号峰味京尼平苷, 6 号峰味黄连碱, 7 号峰为表小檗碱, 8 号峰为药根碱, 10 号峰为小檗碱, 11 号峰为巴马汀, 12 号峰为黄芩苷, 13 号峰为白杨素 -7-O-β-D- 葡萄糖醛酸苷, 14 号峰为千层纸素 -7-O-β-D- 葡萄糖醛酸苷, 15 号峰为汉黄芩苷, 16 号峰为黄芩素, 18 号峰为汉黄芩素, 19 号峰为千层纸素 A
指纹图谱中 22 个共有峰,共指认出 15 个共有峰: 2 号峰味对羟基苯甲酸, 4 号峰味京尼平龙胆双糖苷, 5 号峰味京尼平苷, 6 号峰味黄连碱, 7 号峰为表小檗碱, 8 号峰为药根碱, 10 号峰为小檗碱, 11 号峰为巴马汀, 12 号峰为黄芩苷, 13 号峰为白杨素 -7-O-β-D- 葡萄糖醛酸苷, 14 号峰为千层纸素 -7-O-β-D- 葡萄糖醛酸苷, 15 号峰为汉黄芩苷, 16 号峰为黄芩素, 18 号峰为汉黄芩素, 19 号峰为千层纸素 A 。
来 源:黄祖顺,郭磊,张爱荣,秦雪梅,高晓霞.基于收集药理学和指纹图谱的安宫牛黄丸质量标记物猜测与阐发 [J]. 药物评价研讨, 2023, 46(10): 2083-2093.
安宫牛黄丸为《中国药典》 2020 年版收录丹方,其质量掌握接纳高效液相色谱法限制胆红素、黄芩苷及盐酸小檗碱的含量[ 3 ] 。但该方由多味药构成,药味配伍干系和身分较为庞大,饮片质量也良莠不齐,且现有的质量掌握尺度不高;因而,成立可以片面论述复方质量特性的办法具有严重意义。中药质量标记物( Q-Marker )于 2016 年由刘昌孝院士提出,此观点是指将中药药效 - 活性身分 - 质量掌握标记物身分相干联,为中药质量掌握尺度的团体性成立开辟新思惟[ 4 ] 。本研讨经由过程收集药理学办法挑选安宫牛黄丸枢纽活性身分,并分离超高效液相色谱( UPLC )成立指纹图谱,猜测其潜伏 Q-Marker 。旨在为安宫牛黄丸的片面质控供给根据,为其感化机制研讨供给参考,也为其他中药复方猜测 Q-Marker 供给新的思绪。
( 3 )不变性考查:取安宫牛黄丸(批号: 3792005003 ) 1 份,根据“ 2.2.1 ”项下的办法制得供试品溶液,别离于 0 、 2 、 4 、 8 、 12 、 24 h 根据“ 2.2.3 ”项下色谱前提进样,记载色谱图,计较共有峰的峰面积和保存工夫的 RSD 值。
( 1 )精细度考查:取安宫牛黄丸(批号: 3792005003 ) 1 份,根据“ 2.2.1 ”项下办法制得供试品溶液,按“ 2.2.3 ”项下色谱前提在 UPLC 色谱仪中持续进样 6 次,记载色谱图,计较共有峰的峰面积和保存工夫的 RSD 值。
2.2.2各药材供试品溶液制备 取复方组方药材各 0.1 g (过 40 目筛),别离置于 50 mL 具塞锥形瓶中,精细参加 75% 甲醇 50 mL ,密塞, 30 ℃ 超声处置 30 min ,放至室温,摇匀,静置,用 75% 甲醇补重,取上清液滤过( 0.22 μm 微孔滤膜),取续滤液学习资料库软件,即得。
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按照收集药理学猜测成果一般小孩勤奋进修英语怎样说,安宫牛黄丸中枢纽活性身分小檗碱、黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素别离对应指纹图谱中 10 号峰、 12 号峰、 16 号峰及 18 号峰;麝香酮、槲皮素及熊果酸未找到对应峰,思索能够与色谱前提与检测办法有关。
2.1.2安宫牛黄丸临床顺应证疾病共有靶点的搜集 查询 GeneCards 数据库,并搜集热证疾病靶点,本研讨挑选卒中、高热苏醒、脑炎、脑出血及癫痫等临床顺应证以枢纽词“ stroke ”“ hyperthermic coma ”“ encephalitis ”“ cerebral hemorrhage ”“ epilepsy ”停止检索并挑选,挑选尺度为相干分数( relevance score ) ≥ 10.00 。使用 R×64 4.2.0 软件将上述查询到的疾病靶点取交集后,再与候选活性身分所对应的靶点取交集,以获得安宫牛黄丸阐扬疗效的潜伏感化靶点。使用 UniProt 数据库,正文与校订获得的潜伏感化靶点,物种挑选为“ human ”,并删除反复值。
( 2 )反复性考查:取安宫牛黄丸(批号: 3792005003 ) 1 份,根据“ 2.2.1 ”项下的办法平行制备供试品溶液 6 份,根据“ 2.2.3 ”项下色谱前提进样,记载色谱图,计较共有峰的峰面积和保存工夫的 RSD 值。
3.1.3枢纽靶点及枢纽活性身分肯定 将得到的交集靶点 131 个导入 STRING 数据库,获得 PPI 收集,见图 3 。以度值、介数和靠近中间性参数为前提挑选排名靠前的枢纽靶点学习资料库软件。获得排名前 10 的靶点,别离是 STAT3 、 AKT1 、 MAPK1 等(按拍照关拓扑学参数由高至低排名)。根据与中心靶点相干联的水平搜索到安宫牛黄丸中 7 个枢纽活性身分一般小孩勤奋进修英语怎样说,别离为小檗碱( MOL001454 )、槲皮素( MOL000098 )、汉黄芩素( MOL000173 )、黄芩素( MOL002714 )、熊果酸( MOL000511 )、黄芩苷( MOL002776 )及麝香酮( CAS 号: 541-91-3 ),来自于安宫牛黄丸中黄连、黄芩、栀子及麝香。
3.1.1安宫牛黄丸活性身分及临床顺应证疾病靶点 经 TCMSP 检索并挑选后,获得活性身分 88 个,此中龙脑 3 个、黄连 14 个、黄芩 36 个、牛黄 5 个、郁金 15 个和栀子 15 个。经查阅相干文献搜集水牛角、麝香、雄黄、朱砂、珍珠化学身分一般小孩勤奋进修英语怎样说,并导入 SWISS ADME 数据库,以类药性和胃肠道吸取为前提挑选,获得能够成药、能够被吸取的化学身分共 40 个,此中水牛角 7 个、麝香 22 个、珍珠 11 个。综合共获得 128 个候选活性身分。将 128 个候选活性身分导入数据库中检索对应靶点,去重后共获得 613 个身分相干靶点。
3.1.2“药材 - 活性身分 - 共有靶点”收集阐发 操纵 Cytoscape 软件( 3.8.0 版)构建“药材 - 活性身分 - 共有靶点”收集,获得安宫牛黄丸医治卒中、高热苏醒、脑炎、脑出血、肝性脑病及癫痫的“药材 - 活性身分 - 共有靶点”收集图,见图 2 。成果显现,槲皮素( degree = 32 )、 β- 谷甾醇( degree = 18 )、麝香酮( degree = 16 )、黄芩素( degree = 14 )、小檗碱( degree = 14 )、熊果酸( degree = 12 )、异亮氨酸( degree = 10 )及汉黄芩素( degree = 10 )等身分与各靶点毗连度较高。
2.1.5交集靶点的基因本体( GO )正文及京都基因与基因组百科全书( KEGG )通路富集阐发 操纵 DAVID 数据库对交集靶点停止 KEGG 通路阐发和 GO 阐发,挑选智人( Homo Sapiens )为前提。
2.1.1安宫牛黄丸活性身分及靶点的搜集 操纵 TCMSP 检索并搜集龙脑、黄连、黄芩、牛黄、郁金、栀子 6 味中药活性身分,获得活性身分后挑选,以口服生物利费用( OB ) ≥ 30% 与类药性指数( DL ) ≥ 0.18 尺度[ 5-6 ] 停止身分挑选。安宫牛黄丸中矿物药及植物药如珍珠、水牛角、雄黄、朱砂、麝香在 TCMSP 数据库中无相干材料,经查阅文献报导[ 7-10 ] ,搜集活性身分及响应的 CAS 号,检索 PubChem 数据库,获得相干身分的 sfd 格局的 2 维构造图,将信息导入 SwissADME 数据库,以胃肠道吸取成果为 High 、 5 类类药性成果最少 2 个是 Yes 为尺度,挑选出易成药、易于吸取的活性身分。将获得的活性身分导入 SwissTargetPrediction 数据库搜集对应的靶点,使用 UniProt 数据库,正文与校订获得的靶点基因,物种挑选为“ human ”。
(1)精细度考查:成果测得 22 个共有峰的峰面积的 RSD 值均< 3.93% ,保存工夫的 RSD 均< 0.07% ,表白仪器精细度优良。
接纳收集药理学对安宫牛黄丸停止活性身分挑选与靶点猜测。获得 STAT3 、 VEGFA 及 AKT1 等 10 个枢纽中心靶点,次要触及脂质代谢、炎症反响、细胞免疫等相干机制。 STAT3 曾经被多项研讨证明在脑出血后血肿四周脑构造中表达增长,而且利用该靶点的明显改进脑出血大鼠的神经功用[ 17-18 ] ; VEGFA 可增进血管内皮细胞迁徙、增殖和血管构成,所引诱的血管通透性加强是其在炎症和其他病理情况中阐扬主要感化的根底[ 19 ] 。 GO 富集阐发显现,安宫牛黄丸对缺氧反应历程、卵白酶分离历程、细胞外表等路子具有普遍调理的感化。阐发成果阐明,安宫牛黄丸次要是经由过程调理 AGE-RAGE 旌旗灯号通路、 PI3K-Akt 旌旗灯号通路和 MAPK/ERK 旌旗灯号通路等通路阐扬医治感化。研讨表白,卵白激酶 C 和 MAPKs 等多个细胞内旌旗灯号路子的激活与 AGE-RAGE 旌旗灯号通路亲密相干,从而激发 NF-κB 的活化,增进促炎症细胞因子到场精神病变发作开展,与癫痫病发机制亲密相干[ 20 ] 。实考证明 PI3K/Akt 通路的激活能够对庇护脑缺血起到必然的感化[ 21 ] ,而低落 MAPK/ERK 旌旗灯号通路卵白表达程度对防治缺血性卒中具有优良的结果[ 22 ] 这些是进修英语的好办法英语翻译。
2.2.6安宫牛黄丸指纹图谱类似度评价 别离取 10 批次安宫牛黄丸样品,根据“ 2.2.1 ”项下的办法制备供试品溶液,根据“ 2.2.3 ”项下色谱前提进样,记载色谱图。将色谱图数据导入中药色谱指纹图谱类似度评价体系( 2012.130723 版)并阐发,此中 S6 批次的色谱图的色谱峰峰形和别离度较好,且基线安稳,故挑选该批次色谱图作为比较图谱。类似度评价办法挑选均匀数法,制止极度数据对成果的影响[ 13 ] 。对色谱峰的全谱峰阐发接纳多点校。
经由过程 GeneCards 数据库共获得顺应证疾病交集靶点 938 个,见图 1-A 。取上述靶点与候选活性身分靶点取交集,获得安宫牛黄丸医治卒中、高热苏醒、脑炎、脑出血及癫痫的共有疾病靶点 131 个,包罗 AKT1 、 VEGFA 、 BCL2 等靶点,见图 1-B 。
(2)反复性考查:成果测得 22 个共有峰峰面积的 RSD 值均< 3.81% ,保存工夫的 RSD 均< 0.14% ,表白该办法的反复性优良。
按照安宫牛黄丸的方解,中药牛黄及犀角(水牛角)为组方君药,且当代药理研讨发明这些是进修英语的好办法英语翻译,水牛角具有抗炎镇痛沉着、保持脑血轮回畅达、庇护脑构造的药理活性[ 23 ] 。胆红素是牛黄次要目标身分,具有肃清氧自在基与抗氧化感化[ 24 ] ,且在多种疾病中经由过程抗炎和抗氧化感化修复构造毁伤[ 25 ] ,但在收集药理学挑选过程当中,胆红素 OB 值为 16.53% ,未到达 30% 而被筛除。其他君药身分也未经由过程收集药理学的挑选,不被归入 Q-Marker 范畴做质控身分,思索是相干文献报导及数据库材料较少。组方中佐药包罗珍珠、雄黄及朱砂矿物药,珍珠具有抗朽迈的药理活性[ 26 ] 。而朱砂(主含硫化汞, HgS )和雄黄(主含二硫化二砷, As2S2 )对急性缺血性卒中和脑缺血再灌注毁伤具有神经庇护感化,对逆转卒中而至的皮层单胺类神经递质改动有必然的感化[ 27 ] ,而且阐扬抑止钙超载感化、起到减轻脑水肿、具有脑缺血的庇护及抗细胞凋亡的感化,上述身分多是该复方阐扬芬芳开窍感化的物资根底[ 28 ] 。但朱砂和雄黄作为毒性中药这些是进修英语的好办法英语翻译,不被收集药理学数据库收纳。阐明收集药理学有其范围性,需求完美和开展[ 29 ] 。
(3)不变性考查:成果测得 22 个共有峰峰面积的 RSD 值均< 3.87% ,保存工夫的 RSD 均< 0.08% ,表白供试品溶液在室温下 24 h 内不变。
3.2.3安宫牛黄丸指纹图谱类似度阐发 天生的 10 批样品的叠加图谱,见图 8 。类似度阐发成果表白 10 批安宫牛黄丸样品指纹图谱与比较指纹图谱类似度均在 0.9 以上(表 1 ),表白这 10 批安宫牛黄丸质量较为均一不变,且指纹图谱中 10 号峰、 12 号峰、 16 号峰及 18 号峰出峰工夫及峰形不变,开端猜测枢纽活性身分小檗碱、黄芩苷、黄芩素及汉黄芩素多是安宫牛黄丸的潜伏 Q-Marker [4 ] 。
2.2.1供试品溶液制备 取差别批次安宫牛黄丸大蜜丸,剪碎,研磨混淆,精细称定 0.5 g ,转移至锥形瓶中精细参加 75% 甲醇 25 mL , 30 ℃ 超声提取 30 min ,提取液滤过,扭转蒸发仪蒸干溶剂后,参加甲醇定容至 10 mL ,静置,补重,摇匀,取上清液滤过( 0.22 μm 微孔滤膜),取续滤液,即得。
将收集药理学挑选获得的枢纽活性身分及指纹图谱肯定的枢纽身分的交集身分开端肯定为潜伏 Q-Marker ,操纵 Auto Dock Vina 软件对相干身分与枢纽中心靶点停止份子对接,考证其互相感化活性。从 PubChem ( https : //pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/ )数据库下载 Q-Marker (配体)构造的 mol2 格局, PDB 数据库( http : //)获得枢纽靶点(受体)对应的卵白三维构造 pdb 格局。利用 AutoDock 软件对配体停止判定 root 等,对受体设定原子范例等,并别离将配体及受体魄式转换为 pdbqt 格局,再停止对接并获得分离能计较成果,利用 PyMOL 软件对身分 - 卵白对接成果停止可视化阐发。
安宫牛黄丸为我国传统复方中药中颇负盛名的急症用药[1],是临床中医治高热症的“温病三宝”之一,于清朝温病学家吴鞠通的温病条辨中初次被纪录,成效解毒清热、芬芳醒神、豁痰开窍,主治邪热内陷、高热不退及神昏谵语等热证。卒中、高热苏醒、脑炎、脑出血及癫痫为其典范临床顺应证[2]。
中药和中药制剂质量是中药及相干财产的性命线,但因其身分庞大学习资料库软件,增大了质量评价与掌握的难度。中药 Q-Marker 的建立能够增进中药质量掌握片面性的研讨,为成立中药质量体系化掌握系统开辟了新思绪[ 14 ] 。李晴等[ 15-16 ] 使用收集药理学办法对白术指纹图谱指认的化学身分停止药效活性的考证,此办法烦琐,反复性高。但因为安宫牛黄丸组方庞大,包罗植物药、矿物药与动物药,使用上述办法有必然的范围。本研讨接纳查阅文献与数据库相分离的办法共开掘出 128 种化学身分,再经由过程挑选得到 7 个枢纽活性身分,别离是小檗碱、黄芩苷、汉黄芩素、黄芩素、熊果酸、槲皮素及麝香酮,将获得的活性身分分离指纹图谱阐发猜测 Q-Marker ,并停止份子对接考证以期得到片面精确的 Q-Marker 。
综上,本研讨按照收集药理学猜测成果及指纹图谱成果综合阐发,开端猜测安宫牛黄丸潜伏的 4 种 Q-Marker 别离是黄芩苷、小檗碱、汉黄芩素及黄芩素。而胆红素、麝香酮、槲皮素、 HgS 及 As2S2 等多种身分能够为潜伏的 Q-Marker ,仍需进一步研讨确证。本研讨进一步完美了安宫牛黄丸的质量掌握系统,为其感化机制供给了参考。 Q-Marker 的猜测是一种庞大的历程,特别是关于组方多样、身分庞大的复方,本研讨仍存在必然范围性,但可觉得安宫牛黄丸临床二次开辟供给思绪。
安宫牛黄丸(批号: 3792005003 、 812011001 、 3792008004 、 3792011007 、 3792009006 、 3792008005 、 3842104002 、 3782011002 、 3772009004 、 3842104001 ,对应编号为 S1 ~ S10 ,山西广誉远国药团体有限公司);复方中龙脑等 11 味单味药材均由山西广誉远国药团体有限公司供给,经山西大学中医药当代研讨中间秦雪梅传授审定为牛黄、水牛角、野生麝香、珍珠、朱砂、雄黄、黄连、黄芩、栀子、郁金、龙脑,均契合《中国药典》 2020 年版请求,留样于山西大学中医药当代研讨中间;超纯水(便宜);甲醇(阐发纯,天津大茂化学试剂厂);乙腈、甲酸(质谱级,美国赛默飞世尔科技公司)这些是进修英语的好办法英语翻译。
刘昌孝院士[ 4 ] 提出的 Q-Marker 观点,是需求能够定性定量的特有化学身分,可作为反应中药宁静性和有用性的标示性物资停止质量掌握。而我国传统中药大大都都是自然动物药、植物药及矿物药等。以往中药审定办法包罗基原审定法、性状审定法等具有较大的客观性,而中药内涵活性身分才是决议药效与质量的底子,且鉴于中药复方中学习资料库软件,药材组方庞大,身分多样。任何单一身分没法代表复方的团体特性,而指纹图谱能片面地反应中药所包罗的化学信息,是中药质量掌握的有用手腕[ 30 ] 。基于此,本研讨经由过程成立安宫牛黄丸的指纹图谱,对共有峰停止指认和归属学习资料库软件,表征安宫牛黄丸中化学身分。
2.1.3“药材 - 活性身分 - 共有靶点”收集构建与阐发 操纵 Cytoscape 软件( 3.8.0 版)构建“药材 - 活性身分 - 共有靶点”收集,并使用 Analyzer 东西计较收集拓扑参数,以度( degree ) ≥ 10 倍中位数为挑选前提,数值越大,成为安宫牛黄丸阐扬药效的枢纽活性身分能够性越大。
按照收集药理学阐发成果,从 PDB 数据库中提取前 4 位靶点( AKT1 、 VEGFA 、 STAT3 、 MAPK3 )的卵白三维构造,将其别离与配体小檗碱( A )、黄芩苷( B )、黄芩素( C )及汉黄芩素( D )停止份子对接,分离能见表 2 ,分离能小于 0 ,表白配体与受体能够自觉分离,分离能小于 - 20.92 kJ·mol -1 暗示能够构成不变的对接构造。此中汉黄芩素与 STAT3 、黄芩苷与 MAPK1 均能够发生较强的分离。将 4 种身分与靶点的对接成果操纵 PyMOL 软件停止可视化阐发,见图 9 。
2.2.5安宫牛黄丸指纹图谱共有峰的归属及指认 取 10 批安宫牛黄丸各 1 份,并取安宫牛黄丸中 11 种单味药材,别离根据“ 2.2.1 ”和“ 2.2.2 ”项下的办法制备供试品溶液和各单味药材供试品溶液,根据“ 2.2.3 ”项下色谱前提进样,获得 10 批安宫牛黄丸指纹图谱叠加图。挑选图谱中含量较大且别离度较好的色谱峰作为共有峰。搜集安宫牛黄丸和各单味药材指纹图谱,经由过程比力色谱峰的色谱保存举动对共有峰的药材滥觞停止归属。按照文献报导[ 11-12 ] ,对指纹图谱有峰停止指认。
3.1.4安宫牛黄丸靶点通路阐发 操纵 DAVID 数据库对 131 个交集靶点停止 KEGG 通路阐发和 GO 阐发,经 KEGG 阐发,挑选排名靠前的通路停止可视化阐发,见图 4 。枢纽旌旗灯号通路触及糖尿病并发症中的 AGE- RAGE 旌旗灯号通路、 PI3K-Akt 旌旗灯号通路及 MAPK 旌旗灯号通路等。按照 GO 富集成果发明,安宫牛黄丸起医治感化时,在生物历程( BP )中,对脂多糖、缺氧反应和基因表达正向调控通路等的影响较大;而安宫牛黄丸对同卵白分离、内肽酶活性和卵白酶分离等的份子功用( MF )影响较大;最初对证膜的构成部门、细胞外地区和细胞外表的细胞组分( CC )具有较大感化,见图 5 。
本研讨接纳 UPLC 构建安宫牛黄丸指纹图谱,并分离收集药理学获得的枢纽活性身分,共挑选出 4 种身分作为潜伏的 Q-Marker ,且研讨发明指认出 4 种身分的 10 号峰、 12 号峰、 16 号峰及 18 号峰,在指纹图谱中出峰工夫及峰形不变,在组方制剂中不变存在,能够定性定量研讨。而 Taviano 等[ 31 ] 研讨显现 ig 熊果酸能够抑止癫痫小鼠的中枢神经体系,削减小鼠主动症和癫痫的爆发次数。研讨表白,槲皮素具有包罗抗过敏、抗病毒、抗炎[ 321 ] 、防备癌变、延缓朽迈、庇护血汗管和神经体系等感化[ 33 ] 。 Zhou 等[ 34 ] 报导,麝香酮可经由过程引诱神经干细胞增殖和分化,激活 PI3K/Akt 旌旗灯号通路阐扬在脑缺血卒中的庇护感化,阐明麝香酮在组方医治卒中等脑部疾病阐扬主要感化。但本研讨挑选的 Q-Marker 中没有包罗文献报导中对安宫牛黄丸医治疾病感化较多的及收集药理学挑选获得的熊果酸、槲皮素和麝香酮,能够的缘故原由是槲皮素、熊果酸在复方中含量较低,而麝香酮挥发性强,测定多接纳气相色谱法[ 35 ] 。针对没法测定的活性身分一般小孩勤奋进修英语怎样说,前期能够接纳多谱联用如 NMR 、 GC-MS 、 ICP-MS 和 LC-MS 等阐发手腕。
上述文献研讨表白这些是进修英语的好办法英语翻译,收集药理学猜测的成果与现有相干文献较为靠近,阐明该研讨办法具有必然的精确性和牢靠性,同时也与中药团体性的看法相符合,安宫牛黄丸中多个枢纽性身分可感化于多个靶点,起到医治或干涉疾病的感化。
2.1.4枢纽靶点及枢纽活性身分的肯定 将“ 2.1.2 ”项得到的交集靶点导入 STRING 数据库,去除离散或无联系关系的基因节点,挑选尺度为置信值( medium confidence )= 0.9 ,获得卵白质互相感化( PPI )收集。操纵 Cytoscape 3.8.0 软件阐发获得的 PPI 收集,以度值、介数和靠近中间性参数为前提挑选排名靠前的枢纽靶点。按照“ 2.1.3 ”项得到的活性身分与枢纽靶点的毗连度值这些是进修英语的好办法英语翻译,挑选亲密水平高的枢纽活性身分。
3.2.2安宫牛黄丸指纹图谱共有峰的归属及指认 获得供试品指纹图谱和供试品及单味药材叠加图谱,见图 6 、 7 。安宫牛黄丸指纹图谱有含量较 大且别离度较好的 22 个共有峰, 9 、 12 ~ 19 号峰来自黄芩; 1 、 4 、 6 、 8 、 10 、 11 号峰来自黄连; 2 号峰来自龙脑; 5 号峰来自栀子; 21 号峰来自栀子; 7 号峰在黄连、黄芩中均存在; 3 、 20 号峰未归属到详细药材,有待进一步确证。
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